昆蟲sf9細胞培養(yǎng)

Sf9培養(yǎng)要點：
溫度：27-28攝氏度
pH：，sf9**適的pH6.2，隨培養(yǎng)時間的延長，Ph值會增加
傳代時間：72h（三天左右）
細胞來源：Sf9（貨號B825-01）和Sf21（貨號B821-01）細胞系是傳統(tǒng)的用于桿狀病毒表達的細胞系，源于美G農(nóng)業(yè)部昆蟲病理實驗室。此細胞系適用于InsectSelect系統(tǒng)。這兩株細胞衍生于IPLBSF-21細胞系，來源于秋蠅蠕蟲（草地夜蛾）蛹的卵巢組織。（以上來自invitrogen）
細胞特點：規(guī)則的帶有顆粒球形。貼壁緊。
標準條件的定義：
培養(yǎng)**低密度：0.6/ml（健康對數(shù)生長期細胞活率**少應(yīng)不低于90％?；盥实陀?0％細胞不是在**佳條件下培養(yǎng)不能用于實驗）1×/mL將出現(xiàn)對數(shù)生長狀態(tài)

傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)需將細胞調(diào)整到維持對數(shù)生長狀態(tài)和**大活率。

貼壁培養(yǎng): 貼壁細胞傳代需在細胞長成單層（如下定義）然后1：5（細胞體積：**后培養(yǎng)基體積）稀釋維持對數(shù)生長。形成單層細胞可以傳代培養(yǎng)

懸浮培養(yǎng)：在細胞密度達到2.0×-2.5×細胞/mL后將密度調(diào)整**0.7×-1.0×細胞/mL進行懸浮傳代。確保傳代細胞密度不高于4×個/mL或保持密度高于1×個/mL以達到對數(shù)生長狀態(tài)。

Sf9懸浮培養(yǎng)所需要的細胞數(shù)
培養(yǎng)基：sf-900 Ⅲ SFM（添加2%的血清減小感染過程中蛋白水解量）
培養(yǎng)瓶與培養(yǎng)體積：

凍存：一旦細胞系建立且倍增規(guī)律則可以進行凍存。細胞需達到90％活率和80-90％融合的要求（如：低代次）推薦凍存幾管。當融解細胞，它將會達到**佳使用狀態(tài)。

1. 用細胞計數(shù)板計數(shù)細胞。需要足夠的如上表所示密度的細胞凍存2-4管。細胞可是懸浮或貼壁培養(yǎng)；
2. 將無菌凍存管立于冰上，做好標記；
3. 室溫400-600×g離心10min。移除上清。
4. 以給定的密度在凍存液中重懸細胞；
5. 移取1mL細胞懸液置于無菌凍存管中；
6. 置于-20℃1h，然后移**-80℃24-48h；
7. 儲存于液氮中。

轉(zhuǎn)染的細胞：需要的是對數(shù)期的細胞＞95%發(fā)育能力，可以完成成功的轉(zhuǎn)染。
載氧：對于**優(yōu)生長條件和蛋白的表達，昆蟲細胞要求被動的通氧。積極的通氧系統(tǒng)要求溶氧飽和在10%-50%
Sf900II和sf900Ⅲ的區(qū)別：一般推薦Sf900II來大量表達蛋白

Sf900II含有表面活性劑（剪切力保護劑（保護細胞在轉(zhuǎn)瓶中培養(yǎng)時不會受到剪切力傷害））

當設(shè)計純化多聚組氨酸標簽蛋白的計劃時，注意無血清培養(yǎng)基不能直接用于螯合樹脂，因為培養(yǎng)基的成分會除去樹脂中的鎳離子。
細胞培養(yǎng)的一般順序：復蘇——傳代——傳代穩(wěn)定——凍存
應(yīng)當遵循的一般過程：復蘇——貼壁培養(yǎng)——懸浮——懸浮擴大培養(yǎng)（產(chǎn)生目標蛋白）
（也可不經(jīng)過貼壁培養(yǎng)，直接懸浮培養(yǎng)）
貼壁時間：45min
懸浮的轉(zhuǎn)速：80rpm
附：離心機rcf與g的換算：