傳代步驟：

棄去舊的生長液-->用無鈣鎂水(CMF)沖洗貼壁細胞數次(視細胞瓶的大小,3--5次)-->剩少許CMF,滴入 ATV 2--3滴-->搖勻細胞瓶中的液體,使ATV均勻的分布到瓶里的沒個地方-->放入37度二氧化碳溫箱中3--5min消化-->棄去ATV,加入生長液,拍打吸吹下細胞-->鏡下觀察-->分瓶-->作好記號,放入37度二氧化碳溫箱生長

細胞特點:該細胞生長力強,而且快速一般24h就可以張到80%,48h不傳就會變的很老,所以該細胞傳時要勤點;我感覺MDBK還是很好傳的,比以前我傳的ST、Vero細胞等要好傳一些，且不那么容易死亡，所以是我的一個比較好的選擇！該細胞適合接種皰疹病毒（如：偽狂犬病毒）！

BHK-21：棄除舊的培養液后---用緩沖液沖洗一遍----用0.22%的胰酶消化液消化約兩分鐘左右可以看到細胞像沙子一樣脫落-------趕緊倒掉胰酶加入含10%的牛血清培養液終止消化。但目前G內能找到的BHK-21細胞大部分都有支原體感染，如果是好的BHK-21細胞能做到1比20的分種率。

補充一點關于BHK-21的培養,先用少量胰酶沖洗一下,棄去,再用胰酶消化1min左右,效果會好一些

皮膚成纖維細胞和THP-1細胞：皮膚成纖維細胞是貼壁生長的。THP-1細胞是懸浮的。

由于我們實驗室養細胞的時間也不是很長，所以也只能說說自己平時的操作了。

先說皮膚成纖維細胞。當細胞鋪滿瓶底，也就是細胞與細胞之間沒有間隙時，就可以傳代了。一般十天左右傳一代。先吸棄舊培養液，用D-Hanks液洗兩遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆蓋瓶底為準。加入后輕輕搖晃培養瓶使液體覆蓋瓶底，然后靜置兩分鐘左右，**好是能在顯微鏡下觀察，當細胞之間出現間隙且有一部分細胞呈現圓形后即可。吸去胰酶，加入含血清培養液，搖晃瓶子使培養液覆蓋瓶底就行了。因為血清可以終止胰酶的消化。然后吹打瓶底各處使細胞脫落。再分瓶補加培養液。

THP-1細胞的傳代就比較簡單了。可以有兩種傳代方法。如果鏡下觀察細胞狀態很好，沒有其它雜質即細胞裂解物之類的，就可以采用直接傳代法。傳代前將細胞培養瓶直立一個半小時使細胞自然下沉。吸棄上層少量培養液約三分之一，將余下的培養液分成兩瓶，再分別補加培養液即可。如果鏡下觀察覺得培養液中有雜質即可采用離心傳代法。如果細胞數目較多可以低速離心約600轉離心六分鐘，細胞可以沉淀下來而且可以去除細胞碎片之類的雜質。如果覺得細胞數目不多比較寶貴，那就提高轉速可以1000轉離心六分鐘，這樣細胞損失很少但可能也有些雜質會一起沉淀下來。離心后去除上清液，加入新的培養液吹打渾勻即可分瓶傳代了。